IDENTIFICACIÓN MEDIANTE PCR DEL SEXO DE LA PAPAYA (Carica papaya L.), HÍBRIDO "POCOCÍ"

El objetivo de la presente investigación fue identificar plantas hermafroditas del híbrido de papaya "Pococí". Para la identificación del sexo de las plantas del híbrido "Pococí", se utilizó el protocolo descrito por Deputy et al. (2002), con algunas modificaciones. Esta metodología emplea un PCR múltip le que permite la amplificación simultánea de dos fragmentos (1.300 y 800 pb respectivamente) para plantas hermafroditas y de un solo fragmento (1.300 pb) para plantas femeninas. El ADN se extrajo a partir de hojas de plantas de invernadero o campo con dos metodologías de extracción, CTAB y lisis alcalina (NaOH). La amplificación por PCR del ADN extraído de muestras foliares de papaya híbrido "Pococí", con ambos métodos de extracción, produjo los fragmentos del tamaño esperado. La determinación del sexo de 1.500 plántulas en almácigo mostró un 46 % de plántulas hermafroditas y un 54 % de plantas femeninas. La proporción observada de plantas femeninas: hemafroditas no varió de la esperada (1:1) según la prueba de chi-cuadrado (p= 0,4237). Las plantas hermafroditas fueron llevadas al campo y al momento de la floración se determinó su sexo. La correspondencia entre el sexado por PCR y la expresión sexual en campo fue de un 98 %.

The objective of this work was to identify papaya hermaphrodite plants of the hybrid "Pococí" at the seedling stage using the Polymerase Chain Reaction (PCR). Sex identification was achieved according to the methodology described by Deputy et al. (2002) with some modifications. This methodology employs a multiplex- PCR assay that allows simultaneous amplification of two fragments (800 bp and 1300 respectively) for hermaphrodite plants and one fragment (1300 bp) for female plants. Genomic DNA was extracted from leaves and two extraction protocols were evaluated, CTAB and rapid alkaline lysis (NaOH). The amplification reaction yielded the expected size of the fragments with both methods of DNA extraction. PCR sex determination of 1500 seedlings yielded 46 % of hermaphrodite and 54 % of female plants. The female: hermaphrodite plant ratio observed did not vary from the expected (1:1) ratio according to the chi-square test (p = 0.4237). Hermaphrodite plants were planted in the field in San Carlos region, Costa Rica, and sex was determined at flowering. The correspondence between the PCR sexed plants and sexual expression in the field was 98 %.

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Resumen

Español El objetivo de la presente investigación fue identificar plantas hermafroditas del híbrido de papaya "Pococí". Para la identificación del sexo de las plantas del híbrido "Pococí", se utilizó el protocolo descrito por Deputy et al. (2002), con algunas modificaciones. Esta metodología emplea un PCR múltip le que permite la amplificación simultánea de dos fragmentos (1.300 y 800 pb respectivamente) para plantas hermafroditas y de un solo fragmento (1.300 pb) para plantas femeninas. El ADN se extrajo a partir de hojas de plantas de invernadero o campo con dos metodologías de extracción, CTAB y lisis alcalina (NaOH). La amplificación por PCR del ADN extraído de muestras foliares de papaya híbrido "Pococí", con ambos métodos de extracción, produjo los fragmentos del tamaño esperado. La determinación del sexo de 1.500 plántulas en almácigo mostró un 46 % de plántulas hermafroditas y un 54 % de plantas femeninas. La proporción observada de plantas femeninas: hemafroditas no varió de la esperada (1:1) según la prueba de chi-cuadrado (p= 0,4237). Las plantas hermafroditas fueron llevadas al campo y al momento de la floración se determinó su sexo. La correspondencia entre el sexado por PCR y la expresión sexual en campo fue de un 98 %.

Inglés The objective of this work was to identify papaya hermaphrodite plants of the hybrid "Pococí" at the seedling stage using the Polymerase Chain Reaction (PCR). Sex identification was achieved according to the methodology described by Deputy et al. (2002) with some modifications. This methodology employs a multiplex- PCR assay that allows simultaneous amplification of two fragments (800 bp and 1300 respectively) for hermaphrodite plants and one fragment (1300 bp) for female plants. Genomic DNA was extracted from leaves and two extraction protocols were evaluated, CTAB and rapid alkaline lysis (NaOH). The amplification reaction yielded the expected size of the fragments with both methods of DNA extraction. PCR sex determination of 1500 seedlings yielded 46 % of hermaphrodite and 54 % of female plants. The female: hermaphrodite plant ratio observed did not vary from the expected (1:1) ratio according to the chi-square test (p = 0.4237). Hermaphrodite plants were planted in the field in San Carlos region, Costa Rica, and sex was determined at flowering. The correspondence between the PCR sexed plants and sexual expression in the field was 98 %.