Desarrollo de un método de radioinmunoanálisis para cortisol, utilizando anticuerpos obtenidos y purificados de la yema de huevo de gallinas inmunizadas

Se indujeron anticuerpos anticortisol en gallinas de postura, para lo cual se realizó una primer aplicación de 1 mg de cortisol conjugado con albúmina sérica bovina (BSA) y mezclado con adyuvante completo de Freund y solución salina fisiológica; posteriormente se realizaron seis aplicaciones más de 0.5 mg del mismo inmunógeno, los cuales se aplicaron a intervalos de 15 días. Se encontró en suero un título promedio, durante el periodo de colección del huevo, de 39.4% en una dilución de trabajo 1:1000. Los anticuerpos anticortisol se recuperaron y purificaron a partir de la yema de huevo y con ellos se desarrolló la prueba de radioinmunoanálisis (RIA) de fase líquida. Los anticuerpos de la yema mostraron alta especificidad para el cortisol respecto de otros esteroides (reacción cruzada menor a 0.1% con androstenediona, estradiol, 17-hidroxiprogesterona y testosterona), así como una sensibilidad de 339 pg/ml. La precisión del RIA fue adecuada (C.V. interensayo menor a 15%), al igual que la recuperación del sistema. El rendimiento fue de 594 552.63 mg de proteína, que sirven para procesar 95 000 000 tubos. Se concluye que la yema de huevo de gallinas inmunizadas es una efectiva fuente de anticuerpos anticortisol, la cual puede ser utilizada como una alternativa al suero de conejos.

Production of anti-cortisol antibodies was induced in laying hens. A conjugate of cortisol with bovine serum albumin (BSA) was mixed with Freund’s complete adjuvant and phisiological saline solution. One mg of the steroid was injected, followed by six more injections of 0.5 mg administered every two weeks. During egg collection, a serum titre average of 39.4% at a work dilution of 1:1000 was obtained. In order to develop a liquid phase radioimmunoassay (RIA), the anticortisol antibodies were recovered from the egg yolk, and then purified. Antibodies showed high specificity to cortisol, less than 0.1% cross-reaction with androstenedione, estradiol, 17-hidroxyprogesterone and testosterone with a sensitivity of 339 pg/ml. Accuracy of the RIA was appropriate (less than 15% interassay variation coefficient). The final yield was 594,552.63 mg of protein which can be used to process 95,000,000 tubes. It was concluded that the egg yolk of immunized hens is a good source of anti-cortisol antibodies, and that it can be used as an alternative to rabbit serum.

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Resumen

Inglés Production of anti-cortisol antibodies was induced in laying hens. A conjugate of cortisol with bovine serum albumin (BSA) was mixed with Freund’s complete adjuvant and phisiological saline solution. One mg of the steroid was injected, followed by six more injections of 0.5 mg administered every two weeks. During egg collection, a serum titre average of 39.4% at a work dilution of 1:1000 was obtained. In order to develop a liquid phase radioimmunoassay (RIA), the anticortisol antibodies were recovered from the egg yolk, and then purified. Antibodies showed high specificity to cortisol, less than 0.1% cross-reaction with androstenedione, estradiol, 17-hidroxyprogesterone and testosterone with a sensitivity of 339 pg/ml. Accuracy of the RIA was appropriate (less than 15% interassay variation coefficient). The final yield was 594,552.63 mg of protein which can be used to process 95,000,000 tubes. It was concluded that the egg yolk of immunized hens is a good source of anti-cortisol antibodies, and that it can be used as an alternative to rabbit serum.

Español Se indujeron anticuerpos anticortisol en gallinas de postura, para lo cual se realizó una primer aplicación de 1 mg de cortisol conjugado con albúmina sérica bovina (BSA) y mezclado con adyuvante completo de Freund y solución salina fisiológica; posteriormente se realizaron seis aplicaciones más de 0.5 mg del mismo inmunógeno, los cuales se aplicaron a intervalos de 15 días. Se encontró en suero un título promedio, durante el periodo de colección del huevo, de 39.4% en una dilución de trabajo 1:1000. Los anticuerpos anticortisol se recuperaron y purificaron a partir de la yema de huevo y con ellos se desarrolló la prueba de radioinmunoanálisis (RIA) de fase líquida. Los anticuerpos de la yema mostraron alta especificidad para el cortisol respecto de otros esteroides (reacción cruzada menor a 0.1% con androstenediona, estradiol, 17-hidroxiprogesterona y testosterona), así como una sensibilidad de 339 pg/ml. La precisión del RIA fue adecuada (C.V. interensayo menor a 15%), al igual que la recuperación del sistema. El rendimiento fue de 594 552.63 mg de proteína, que sirven para procesar 95 000 000 tubos. Se concluye que la yema de huevo de gallinas inmunizadas es una efectiva fuente de anticuerpos anticortisol, la cual puede ser utilizada como una alternativa al suero de conejos.