It is the cache of http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0025-76802005000500007. It is a snapshot of the page. The current page could have changed in the meantime.
Tip: To quickly find your search term on this page, press Ctrl+F or ⌘-F (Mac) and use the find bar.

Medicina (Buenos Aires) - Linfoma del manto vs. Leucemia linfática crónica atípica: Utilización de inmunohistoquímica, citometría de flujo y biología molecular para su correcta tipificación

SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.65 número5Takotsubo, discinesia apical transitoria: Presentacion de 4 casos y revisión de la literaturaOsteoporosis regional transitoria y distrofia simpática refleja: ¿una misma enfermedad? índice de autoresíndice de materiabúsqueda de artículos
Home Pagelista alfabética de revistas  

Servicios Personalizados

Articulo

Indicadores

  • No hay articulos citadosCitado por SciELO

Links relacionados

  • En proceso de indezaciónCitado por Google
  • No hay articulos similaresSimilares en SciELO
  • En proceso de indezaciónSimilares en Google

Bookmark


Medicina (Buenos Aires)

versión On-line ISSN 1669-9106

Medicina (B. Aires) v.65 n.5 Buenos Aires sep./oct. 2005

 

Linfoma del manto vs. Leucemia linfática crónica atípica. Utilización de inmunohistoquímica, citometría de flujo y biología molecular para su correcta tipificación

Mariana Gómez Pescie, Valeria Denninghoff, Alejandro García1, Carla Rescia1, Alejandra Avagnina, Boris Elsner

Servicio de Patología,
1 Servicio de Citometría de Flujo, CEMIC, Buenos Aires.

Dirección postal: Dr. Boris Elsner, Servicio de Patología, CEMIC, Galván 4102, Buenos Aires, Argentina Fax: (54-11) 4546-8264 e-mail: belsner@cemic.edu.ar

Resumen
Algunos procesos linfoproliferativos B CD5+ son de difícil diagnóstico diferencial como es el caso del linfoma del manto (LM) y la leucemia linfocítica crónica atípica (LLCA). El motivo del presente estudio fue correlacionar los hallazgos morfológicos, la detección de ciclina D1 (cD1) por inmunohistoquímica (IHQ) y el inmunofenotipo por citometría de flujo (CF) con los resultados obtenidos por biología molecular en este tipo de neoplasias. Se estudiaron 20 muestras clasificadas como procesos linfoproliferativos B CD5+ por CF. Se realizó la determinación de t(11;14) bcl-1/IgH por PCR. El estudio histopatológico e IHQ para cD1 se efectuó en 14 casos. Doce casos fueron diagnosticados como LM, con cD1 positiva en 5 (5/9); cinco como LLCA y tres como proceso linfoproliferativo B. Con PCR se observó t(11;14) en 6/12 LM y negatividad en los restantes grupos (0/8). Se pudo demostrar la presencia de traslocación en 7/12 LM mediante IHQ Y PCR: 4 con ambas técnicas, 2 con PCR exclusivamente y 1 con IHQ, evidenciando una alta asociación entre cD1 por IHQ y la detección del gen bcl-1/IgH por PCR, ambas técnicas complementarias en la tipificación de LM.

Palabras clave: Linfoma del manto; Leucemia linfática crónica atípica; Ciclina D1; t(11;14)(q13;q32); bcl-1

Abstract
Mantle cell lymphoma vs. atypical chronic lymphocytic leukemia. Use of immunohistochemistry, flow cytometry and molecular biology for their adequate typing.
The differential diagnosis of certain B CD5+ lymphoproliferative processes, such as mantle cell lymphoma (MCL) and atypical chronic lymphocytic leukemia (ACLL), is difficult. The aim of this study was to correlate morphological findings, cyclin D1 (cD1) detection by immunohistochemistry (IHC) and immunophenotype by flow cytometry (FC) with the results obtained by molecular biology in this type of neoplasias. We analyzed 20 samples classified as B CD5+ lymphoproliferative processes by FC. PCR was used for t(11;14) bcl-1/IgH determination. Histopathological and IHC studies for cD1 were done in 14 cases. Twelve cases were diagnosed as MCL, with positive cD1 in 5 (5/9), five as ACLL and three as B lymphoproliferative process. PCR revealed t(11;14) in 6/12 MCL and negative results in the other groups (0/8). Molecular biology evidenced translocation in 4/5 MCL positive for cD1 with IHC. The presence of translocation could be demonstrated by IHC and PCR in 7/12 MCL: 4 with both techniques, 2 with PCR alone, and 1 with IHC alone. These findings show a significant association between cD1 by IHC and bcl-1/IgH gene detection by PCR, which implies that both techniques are complementary for MCL typing.

Key words: Mantle cell lymphoma; Atypical chronic lymphocytic leukemia; Cyclin D1; t(11;14)(q13;q32); bcl-l

La combinación de datos clínicos, hallazgos morfológicos y características inmunofenotípicas permiten arribar a un diagnóstico en la mayoría de los procesos linfoproliferativos crónicos B. No obstante, el mismo sigue siendo incierto en un pequeño porcentaje de casos, como el que se presenta con algunas neoplasias B CD5+.
El linfoma de células del manto (LM) es una entidad clinicopatológica con rasgos morfológicos, inmunofenotípicos y moleculares bien definidos1. Se presenta en estadios avanzados (III/IV) con adenopatías generalizadas, hepatoesplenomegalia e infiltración de médula ósea. El compromiso de sangre periférica se observa en un 25% de los casos, y de los sitios extranodales el tracto gastrointestinal es el más comúnmente afectado2-5. El inmunofenotipo es bastante característico. Por inmuno-histoquímica (IHQ) se observa marcación positiva para CD45, CD20, CD5 y bcl-2, y negatividad con CD10 y CD23. Presenta además una tinción nuclear con el anticuerpo monoclonal ciclina D1 (cD1), cuya sobreexpresión se debe a la presencia en estos linfomas de la traslocación t(11;14)(q13;q32). Si bien esta marcación es altamente específica y sensible, la cD1 es muy lábil, y puede verse afectada por la fijación o el procesamiento2, 6, 7. Por citometría de flujo (CF), es positiva además para CD19, CD22, CD24, FMC7, CD79b y expresa en forma intensa inmunoglobulinas de superficie (sIg) IgM e IgD. El 60% tienen restricción para cadenas livianas lambda y el resto kappa2, 8-10. Además del LM clásico existen variantes fenotípicas con expresión variable de CD5, CD23 y positividad con CD102, 10, 11.
Desde el punto de vista molecular la translocación t(11;14)(q13;q32) está caracterizada por un rearreglo aberrante entre los genes de la cadena pesada de las inmunoglobulinas en la región JH del cromosoma 14 y el protooncogen bcl-1 en el cromosoma 11, que codifica para la proteína cD18, 12. El locus BCL1 rearregla en la mayoría de los pacientes con LM y la ruptura está localizada dentro de un fragmento de 1Kb de ADN conocido como cluster de traslocación mayor (MTC). Casos ocasionales presentan rupturas en regiones denominadas cluster de traslocación menor (mTC)8, 13. La traslocación puede ser detectada por Hibridización in situ fluorescente (FISH), Southern Blot, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o citogenética14-25. La PCR detecta rupturas en el MTC con una sensibilidad que varía entre el 33 y el 56%, pudiendo ser utilizada a partir de ADN de alto peso molecular o a partir de ADN obtenido desde tejidos fijados en formol e incluidos en parafina. Con la utilización de FISH estos valores alcanzan el 90 al 100%1, 2, 26.
El diagnóstico diferencial con otros linfomas de linfocitos pequeños puede ser más dificultoso en localizaciones extraganglionares por lo cual deben correlacionarse estrechamente los hallazgos clínicos, morfológicos, fenotípicos y eventualmente genético/moleculares2- 4, 27, 28.
La leucemia linfática crónica (LLC), caracterizada por linfocitos pequeños y cromatina granular, con inmunofenotipo clásico que se basa en el score de cinco marcadores descriptos por Matutes et al., resulta de sencillo diagnóstico29. En contraste, la LLC Atípica (LLCA) de morfología heterogénea, inmunofenotipo variable y curso clínico más agresivo, puede plantear dificultades en el diagnóstico diferencial con el LM30. La LLCA puede presentar cambios morfológicos atípicos (presencia de prolinfocitos, linfocitos grandes o células clivadas) pero con el inmunofenotipo clásico de LLC, o por el contrario presentar variantes fenotípicas (negatividad con CD5 o CD23, positividad con FMC7 o CD11c, fuerte expresión de sIg o CD79b) en el contexto de una morfología clásica10.
El LM se ha convertido en un desafío para patólogos y hematólogos ya que reúne las peores características de los linfomas de alto y bajo grado, presentando un curso agresivo con una morfología aparentemente indolente y una pobre respuesta terapéutica. La sobrevida media es de 3 a 4 años en la mayoría de las series, siendo significativamente menor que las otras formas de linfomas "linfocíticos" o de bajo grado histológico. Por todo lo antedicho, el diagnóstico certero de esta entidad adquiere una importancia capital para el pronóstico y tratamiento4.
El motivo del presente estudio es correlacionar los hallazgos morfológicos, la detección de cD1 por inmunohistoquímica y el inmunofenotipo por citometría de flujo con los resultados obtenidos por biología molecular en este tipo de neoplasias.

Materiales y métodos

Se analizaron 20 muestras en fresco en el Servicio de Patología de CEMIC entre 1999 y marzo del 2004, correspondientes a ganglio linfático (GL), bazo, médula ósea (MO) y sangre periférica (SP), las dos últimas anticoaguladas con EDTA. Las mismas fueron seleccionadas por CF con criterios morfológicos e inmunofenotípicos de neoplasias linfoides B CD5+ que no presentaran un fenotipo de LLC típica. Las muestras correspondieron a 18 pacientes (15 hombres y 3 mujeres) con una edad media de 58.6 años (rango de 33 a 78).
Histopatología: El estudio histopatológico e inmuno-histoquímico para la demostración de cD1 se realizó en 14 casos. Las biopsias fueron fijadas con una solución buffer de formol y embebidas en parafina. Se realizaron cortes de 3 µm los cuales fueron coloreados con hematoxilina y eosina. Se obtuvieron nuevas secciones de 3 µm y se incubaron con el anticuerpo monoclonal primario anticiclina D1, clon DCS-6 (DAKO, Carpenter, California, EE.UU., 1:50) utilizando el complejo avidina-biotina aplicando el kit Vectastin Elite (Vector Labs, Burlingame, EE.UU.). Se reveló con el cromógeno 3,3'-diaminobenzidina (Aldrich), se acentuó la marcación con sulfato cúprico y se contrastó con hematoxilina virada en carbonato de litio.
Citometría de Flujo: 18 muestras fueron analizadas por CF, aplicándose el score de Matutes de LLC para su clasificación inmunológica (Tabla 1). En dos muestras correspondientes al mismo paciente no se realizó CF, obteniéndose material para histología, IHQ y biología molecular (BM) en la primera muestra y sólo para BM en la segunda, para detección de enfermedad residual post-quimioterapia. En todos los casos se efectuó separación de mononucleares por gradiente de densidad con Ficoll-Hipaque (Sigma, St. Louis, EE.UU.), previa disgregación mecánica en las correspondientes a GL y bazo. Las células se centrifugaron durante 20 minutos a 3000 r.p.m. El material obtenido fue resuspendido en buffer PBS y centrifugado a 1500 r.p.m. durante 25 minutos. Las muestras se dividieron en tubos con un recuento final de 5x105células por tubo y fueron marcadas con 20 µl de los siguientes anticuerpos mono y policlonales: CD7 (FITC), CD8 (FITC), CD11c (PE), CD23 (FITC), CD38 (PE), FMC7 (FITC) de Immunotech (Marsella, Francia), CD3 (PE), CD4 (PE), CD5 (FITC), CD10 (FITC y PE), CD14 (PE), CD19 (PE y PerCP), CD20 (PE), CD25 (FITC), CD45 (FITC y PerCP), CD79b (FITC), CD103 (FITC) de Becton Dickinson (San José, CA, EE.UU.), k: kappa (FITC), l: lambda (FITC y PE) de Dako (Glostrup, DK). Los tubos fueron incubados en la oscuridad a 4°C durante 30 minutos. Luego fueron lavados con buffer PBS y centrifugados a 1500 r.p.m. durante 15 minutos; se descartó el sobrenadante. Se resuspendieron en buffer PBS y se analizaron con un citómetro de flujo FACScan de Becton Dickinson Immunocytometry Systems utilizando el programa CELL Quest. Se realizó análisis multiparamétrico de las distintas poblaciones celulares basado en propiedades morfológicas: Forward scatter (FSC) y Side scatter (SSC), y la intensidad de la fluorescencia. Las poblaciones se discriminaron basándose en FSC, SSC y la expresión de CD45.

Biología molecular: Se purificó ADN a partir de 20 muestras en fresco. Se digirieron en Buffer-PK (100mM Tris ClH-ph=8, 25mM EDTA, 0.5% SDS, 0.01% PK) a 42°C ON. Las fracciones lipo-proteicas fueron extraídas con fenol-cloroformo-isoamílico (Carlo Erba, Italia). El ADN purificado fue precipitado con ClNa/isopropanol y resuspendido en T10E1 (Tris-EDTA). La pureza y el rendimiento del ADN obtenido fueron medidos por espectroscopia. La reacción de PCR fue realizada según el protocolo Biomed-2. Uno de los primers utilizados25 mapea en una región de 472 pb hacia el extremo 5' de la ruptura, BCL1-MTC (GenBank acceso n° S77049) y el otro primer tiene un consenso para secuencias JH. En cada pool de reacciones se amplificó ADN correspondiente a un linfoma del manto con t(11;14) como control positivo, ADN purificado a partir de leucocitos extraídos de sangre de paciente normal como control negativo y ausencia de ADN (agua) como blanco de amplificación. Todas las muestras fueron probadas para un fragmento de 110 pb del gen de la beta-globina humana como control de amplificación, verificando la ausencia de inhibidores de la PCR en la muestra. Las PCR fueron evaluadas mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 9% en buffer TBE 1X (Tris-bórico-EDTA), visualizadas con bromuro de etidio bajo luz ultravioleta y fotografiada.
En el análisis estadístico se efectuó el coeficiente de correlación de Kendall´s tau-b para variables nominales a fin de determinar el grado de correlación entre los diferentes métodos empleados en el diagnóstico de este tipo de neoplasias.

Resultados

Basándose en los datos clínicos, cuadro cito o histológico, y en el patrón inmunofenotípico completo (CD5, CD23, FMC7, CD79b, intensidad del CD20, CD11c e inmuno-globulinas de superficie) por citometría de flujo, se diagnosticaron 12/20 muestras como LM, 5/20como LLCA y 3/20 como proceso linfoproliferativo B probable manto o LLC (PLB LLC/LM) (Tabla 2). El estudio histopatológico e inmunohistoquímico se realizó en 7 ganglios linfáticos, 6 médulas óseas y un bazo (Tabla 2). Los cortes histológicos mostraron en 9 casos, morfología de manto con borramiento de la histoarquitectura por una proliferación linfoide neoplásica constituida por células de tamaño pequeño a mediano con núcleos irregulares, ocasionalmente clivados, cromatina granular y nucléolos inconspicuos. El patrón de crecimiento era nodular en dos casos y difuso en los restantes. En dos preparados histológicos de MO y GL se observó que la proliferación estaba constituida por células de mayor tamaño con marcado pleomorfismo nuclear y un elevado índice mitótico correspondiente a la variante blastoide de LM (Fig. 1A). La inmunomarcación con cD1 demostró positividad nuclear en 5/9 casos de LM diagnosticados histopatológicamente (Fig. 1B). Los casos diagnosticados como LLCA mostraron la presencia de células de tamaño pequeño a intermedio con núcleos irregulares, algunas con nucléolo e inmunotinción con cD1 negativa en todos ellos.

Fig. 1. A.– Linfoma del manto: células de tamaño intermedio con núcleos irregulares y nucléolos inconspicuos (HE 400 x). B. Positividad nuclear (flecha) con la técnica inmunohistoquímica ciclina D1 (400 x).

Como se muestra en la Tabla 3, con la aplicación del score de Matutes por CF se obtuvo un score bajo de 1 en 7 casos de LM, observándose sólo positividad con CD5. Los otros tres LM presentaron un score de 2. En los 5 casos diagnosticados como LLCA el puntaje fue de 3, mientras que el grupo PLB LLC/LM (tres casos) obtuvo un puntaje de 2.

Se observó t(11;14) mediante PCR en 6 casos (Fig. 2), todos diagnosticados como LM en el estudio histopatológico y/o inmunofenotípico por CF previo (6/12) (Tabla 2). La banda de amplificación se situó en todos los casos entre 300 y 400 pares de bases. Los restantes grupos (LLCA y PLB LLC/LM) fueron negativos (0/8). Se pudo demostrar la presencia de la traslocación mediante PCR o su producto proteico de fusión mediante IHQ en 7/12 LM: 4 con ambas técnicas, 2 con PCR exclusivamente y 1 con IHQ.

El test de Kendall arrojó una alta asociación entre la positividad con cD1 por IHQ y la detección de t(11;14) por PCR, la que resultó estadísticamente significativa (p 0.01).

Discusión

El diagnóstico diferencial entre LM y otros procesos linfoproliferativos B de linfocitos pequeños es de vital importancia. Si bien en la mayoría de los casos la diferenciación entre las distintas entidades puede realizarse correctamente basándose en la clínica, morfología e inmunofenotipo; existen algunos casos, especialmente en muestras de sangre periférica, médula ósea u otros tejidos extraganglionares, que se presentan como leucemias linfocíticas crónicas "atípicas" que son CD5 positivas con una marcación para CD23 a veces de difícil interpretación, sumado a resultados de ciclina D1 variables (por la labilidad de este marcador), que pueden presentar dificultades para su correcta clasificación. En estas situaciones es de gran utilidad el estudio genético/molecular2, 31.
En nuestra serie de casos, la utilización del score de Matutes fue útil para discriminar los casos de LM (10/18) de los de LLCA (5/18). La CF pudo detectar los casos de LM basándose en la presencia de CD5 y ausencia de CD23, con fuerte expresión de sIg, CD22/CD79b y FMC7. La aplicación de score arrojóun puntaje de 1 en la mayoría de los casos (7/10), mientras que en los casos diagnosticados como LLCA el puntaje fue de 3, siendo CD5 y CD23 los marcadores más sensibles.
De los anticuerpos usados en el diagnóstico de LM, la ciclina D1 es el más específico. La sobreexpresion de ciclina de D1 en estos linfomas se debe a la traslocación t(11;14) (q13;q32)1. Existen evidencias de que la desregulación de la ciclina D1 es un evento importante en la génesis tumoral y soporta la hipótesis de que el LM se originaría en la zona más interna del manto folicular8. Sin embargo, no todos los casos muestran positividad con este anticuerpo. Algunos autores lo atribuyen a la elección del antisuero primario y métodos usados en la recuperación antigénica1, 6, 7. En este estudio se observó positividad con cD1 en 5/9 casos de LM, cifras levemente inferiores a las reportadas en otras series, en las que la sensibilidad de la IHQ oscila entre un 69 y un 97%1, 8, 11,26. No obstante, se pudo demostrar la presencia de t(11;14) por PCR en 6/12 LM con una capacidad de detección del método similar a la reportada en la literatura1, 8, 15, 17 y se observó una alta asociación entre cD1 por IHQ y la detección del gen bcl-1/IgH por BM, la que resultó estadísticamente significativa (p 0.01). Esto podría deberse a la existencia de una relación directa entre la presencia de la traslocación en el MTC y los niveles de expresión de la proteína. Consideramos que ambas técnicas aplicadas en forma conjunta, aumentan la sensibilidad diagnóstica de LM. La sensibilidad de la PCR del BIOMED-2 BCL1/JH (entre 10-3 y 10-4) es suficientemente alta para la detección de la ruptura BCL1/JH en el material diagnóstico. Sin embargo, se debe recordar que la detección de la t(11;14) en LM es de 40-50% por PCR y serán necesarias otras herramientas adicionales para su detección25. La demostración de la t(11;14) (q13; q32) debe ser considerada de valor diagnóstico, de clasificación y detección de enfermedad residual para LM.

Abreviaturas

BM: Biología molecular
cD1: Ciclina D1
CF: Citometría de flujo
MTC: Cluster de traslocación mayor
mTC: Cluster de traslocación menor
GL: Ganglio linfático
FISH: Hibridización in situ fluorescente
sIg: Inmunoglobulinas de superficie
IHQ: Inmunohistoquímica
LLC: Leucemia linfática crónica
LLCA: Leucemia linfática crónica atípica
LM: Linfoma de células del manto
MO: Médula ósea
NEG: Negativo
POS: Positivo
PLB: Proceso linfoproliferativo B
PCR: Reacción en cadena de la polimerasa
SP: Sangre periférica

Agradecimientos: Agradecemos a Fernando Poletta por el asesoramiento estadístico, Valeria P. Melia, de la Unidad de Investigación Dr. Baron, por la traducción al inglés del resumen del trabajo y a CEMIC por el Subsidio Anual para Profesionales Jóvenes de CEMIC 2003 otorgado para la realización del trabajo.

Bibliografía

1. Kodet R, Mrhalová M, Krsková L, et al. Mantle cell lymphoma: improved diagnostics using a combined of inmunohistochemistry and identification of t(11;14) (q13;q32) by polymerase chain reaction and fluorescence in situ hybridization. Virchows Arch 2003; 442: 538-47.         [ Links ]
2. Knowles DM. Neoplastic Hematopathology. 2nd ed. Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins, 2001.         [ Links ]
3. Schlette E, Lai R, Onciu M, Doherty D, Bueso-Ramos C, Medeiros J. Leukemic mantle cell lymphoma: clinical and pathologic spectrum of twenty-three cases. Mod Pathol 2001; 14: 1133-1140.         [ Links ]
4. Ruchlemer R, Parry-Jones N, Brito-Babapulle V et al. B-prolymphocytic leukaemia with t(11;14) revisited: a splenomegalic form of mantle cell lymphoma evolving with leukaemia. Br J Haematol 2004; 125: 330-6.         [ Links ]
5. Gu J, Huh YO, Jiang F, et al. Evaluation of peripheral blood involvement of mantle cell lymphoma by fluorescence in situ hybridization in comparison with immunophenotypic and morfologic findings. Mol Path 2004; 17: 553-60.         [ Links ]
6. Cheuk W, Wong K, Wong C, Chan JK. Consistent immunostaining for cyclin D1 can be achieved on a routine basis using a newly available rabbit monoclonal antibody. Am J Surg Pathol 2004; 28: 801-7.         [ Links ]
7. Barranco C, Mate J, Atiza A, et al. Catalyzed signal amplification for cyclin D1 detection in mantle cell lymphoma. Mod Pathol 2003; 16: 161-5.         [ Links ]
8. Swerdlow SH, Williams ME. From Centrocytic to Mantle cell lymphoma: A clinicopathologic and molecular review of 3 decades. Hum Pathol 2002; 33: 7-20.         [ Links ]
9. Gong JZ, Lagoo AS, Peters D, Horvatinovich J, Benz P, Buckley PJ. Value of CD23 determination by flow cytometry in differentiating mantle cell lymphoma from chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma. Am J Clin Pathol. 2001; 116: 893-7.         [ Links ]
10. Jaffe ES, Harris NE, Stein H, Vardiman JW. World Hearth Organization Classification of Tumours (WHO) Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. 1er ed. Lyon: IARC Press, 2001.         [ Links ]
11. Schelette E, Fu K, Medeiros J. CD23 expression in mantle cell lymphoma: clinicopathologic features of 18 cases. Am J Clin Pathol 2003; 120: 760-6.         [ Links ]
12. Raffeld M, Jaffe ES. Rearrangement of CCND1 (BCL1/PRAD1) 3' unstranslated region in mantle cell lymphoma and t(11q13) associated a leukemias. Blood 1994; 83: 3689-96.         [ Links ]
13. Stamatopoulus K, Kosmas C, Belessi C, et al. Molecular analysis of bcl-1/IgH junctional sequences in mantle cell lymphoma: potential mechanism of the t(11;14) chromo-somal traslocation. Br J Haematol 1999; 105: 190-7.         [ Links ]
14. Rimokh R, Berger F, Delso G, et al. Detection of chromosomal traslocation t(11;14) by polimerase chain reaction in mantle cell lymphoma. Blood 1994; 83: 1871-5.         [ Links ]
15. Fan H, Gulley M, Gascoyne R, Horsman D, Adomat S, Cho Ch. Molecular methods for detecting t(11;14) trans-location in mantle-cell lymphomas. Diagn Mol Path 1998; 7: 209-14.         [ Links ]
16. Belaud-Rotureau MA, Parrens M, Dubus P, Garroste JC, de Mascarel A, Merlio JP. A comparative analysis of FISH, RT-PCR, PCR and immuno histochemistry for the diagnosis of mantle cell lymphomas. Mod Pathol 2002; 15: 517-25.         [ Links ]
17. Pinyol M, Campo E, Nadal A, et al. Detection of the bcl-1 rearrangement at the major translocation cluster in frozen and paraffin-embedded tissues of mantle cell lymphoma by polimerase chain reaction. Am J Clin Pathol 1996; 105: 532-7.         [ Links ]
18. Pott C, Tiemann M, Linke, B, et al. Structure of bcl-1 and Igh-CDR3 rearrangement as clonal markers in mantle cell lymphomas. Leukemia 1998; 12: 1630-7.         [ Links ]
19. Lim L, Segal G, Wittwer C. Detection of the bcl-1 gene rearrangement and B-cell clonality in mantle cell lymphoma using formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. Am J Clin Pathol 1995; 104: 689-95.         [ Links ]
20. Bijwaard KE, Aguilera NS, Monnczac Y, Trudel M, Taubenberger JK, Lichy JH. Quantitative real-time reverse transcription PCR assay for cyclin D1 expression: Utility in the diagnosis of mantle cell lymphoma. Clinical Chemistry 2001; 47: 195-201.         [ Links ]
21. Specht K, Kremer M, Muller U, et al. Identification of cyclin D1 mRNA overexpression in B-cell neoplasm by real time reverse transcription-PCR of microdissected paraffin sections. Clin Cancer Res 2002; 8: 2902-11.         [ Links ]
22. Bea S, Ribas M, Hernandez JM, et al. Increased number of chromosomal imbalances and high-level DNA amplifications in mantle cell lymphoma are associated with blastoid variants. Blood 1999; 93: 4365-74.         [ Links ]
23. Vasef MA, Medeiros LJ, Koo C, McCourty A, Brynes RK. Cyclin D1 immuhistochemical staining is useful in distinguishing mantle cell lymphoma from other low-grade B-cell neoplasm in bone marrow. Am J Clin Pathol 1997; 108: 302-7.         [ Links ]
24. Soslow RA, Zukerberg LR, Harris NL, Warnke RA. BCL-1 (PRAD-1/Ciclin D-1) overexpression distinguishes the blastoid variant of mantle cell lymphoma from B-lineage lymphoblastic lymphoma. Mod Pathol 1997; 10: 810-7.         [ Links ]
25. Van Dongen JJM, Langerak AW, Brüggemann M, et al. Design and standarization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations. Leukemia 2003; 17: 2257-317.         [ Links ]
26. Athanasiou E, Kotoula V, Hytiroglou P, Kouidou S, Kaloutsi V, Papadimitriou, CS. In situ hybridization and reverse transcription-polymerase chain reaction for cyclin D1 mRNA in the diagnosis of mantle cell lymphoma in paraffin-embedded tissues. Mod Pathol 2001; 14: 62-71.         [ Links ]
27. Kremer M, Dirnhofer S, Nicki A, Hoefler H, Quintanilla-Martinez L, Fend F. p 27kip1 Inmunostaining for the differential diagnosis of small B-cell neoplasms in trephine bone marrow biopsies. Mod Pathol 2001; 14: 1022-9.         [ Links ]
28. Schenka A, Gascoyne RD, Duchayne E, Delsol G, Brousset P. Prominent intrasinusoidal infiltration of the bone marrow by mantle cell lymphoma. Hum Pathol 2003; 34: 789-91.         [ Links ]
29. Matutes E, Owusu-Ankomah K, Morilla M, et al. Oscier DO The immunological profile of B-cell disorders and proposal of a scoring system for the diagnosis of CLL. Blood 1994; 8: 1640-5.         [ Links ]
30. Denney V, Michaux L, Leveugle P, et al. Atypical lymphocytic leukemia and mantle cell lymphoma immunologically very close: Flow cymetric distincion by the use of CD20 and CD54 expression. Leukemia 2001; 15: 1458-65.         [ Links ]
31. Cro L, Guffanti A, Colombi M, et al. Diagnostic role and prognostic significance of a simplified immunophenotypic classification of mature B cell chronic lymphoid leukemias. Leukemia 2003; 17: 125-32.         [ Links ]

Recibido: 10-5-2005
Aceptado: 8-6-2005