J Chin Integr Med, 2004, 2(1): 49-52

作者简介: 李涌健（1957-），男，硕士，主任医师. 

基金项目: 江苏省中医药管理局基金资助项目(No.1997-23-11)

      癌转移与癌症的死亡有直接或间接的关系^［1］，临床上治疗失败的癌症患者大多是由于癌瘤的转移。因此，研究和探索防治恶性肿瘤转移的有效方法是提高恶性肿瘤患者远期生存率的一个重要方面。临床和实验研究提示扶正中药具有一定的抗转移作用^［2,3］。本研究探讨益气养阴法防治癌转移的作用机制，结果报告如下。

1  材料与方法
1.1   实验动物   C57BL/6纯种小鼠，20～22周龄，雄性，体重22～24 g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司。
1.2   瘤株   B16黑色素瘤及Lewis肺癌种鼠均购自上海医药工业研究院。
1.3   造模方法
1.3.1   小鼠Lewis肺癌模型   C57BL/6小鼠皮下移植传代，取传代后14 d左右的种鼠，无菌操作，从小鼠腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维组织和坏死部分，置组织研磨器中剪碎，加4℃生理盐水轻轻研磨、过滤，制成瘤细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁷/ml，取上述瘤细胞悬液0.2 ml（含瘤细胞数2×10⁶个），种植于C57BL/6小鼠右腋皮下，接种完毕后次日开始灌喂中药。
1.3.2   B16黑色素瘤模型   用含20％小牛血清的RMPI1640培养液培养B16细胞于25 cm²的培养瓶中，在37℃ 5％ CO₂培养箱中培养、扩增，达到实验所需细胞数后，用0.25％胰酶消化，离心收集B16黑色素瘤细胞，用台盼蓝染色，细胞成活率在90％以上，将细胞悬液浓度调整为1×10⁶/ml，取上述细胞悬液0.2 ml，采用尾静脉注射方式接种于C57BL/6小鼠，接种完毕后次日开始灌喂中药。
1.4   分组与治疗   接种造模后的实验小鼠用抽签法分为益气组、养阴组、益气养阴组、化疗组和空白对照组，每组10只小鼠。益气组中药处方组成：黄芪、党参、白术、猫人参、石上柏，按3∶1∶1∶3∶3的剂量比例组方，浓煎成含生药2 g/ml的合剂，灌0.2 ml/d，共10 d。养阴组中药处方组成：生地、猫人参、石见穿、鳖甲、天门冬，按3∶3∶3∶3∶1的剂量比例组方，药物浓度同益气组，灌0.2 ml/d，共10 d。益气养阴组中药处方组成：黄芪、党参、白术、生地、鳖甲、天冬、猫人参、石上柏、石见穿，按3∶1∶1∶3∶3∶1∶3∶3∶3的剂量比例组方，药物浓度同益气组，灌0.2 ml/d，共10 d。化疗组：将顺氯氨铂（山东齐鲁制药厂生产，批号：9712056，规格20 mg/瓶）用生理盐水稀释成0.2 mg/ml，参照文献^［4］用量，以1 mg/kg腹腔注射，1次/d，共7 d。
1.5   观察指标   （1）瘤重抑制率：治疗10 d后，脱椎处死小鼠，剥离瘤体，剔除筋膜，用电子天平称重，计算各组瘤重抑制率。瘤重抑制率＝（空白对照组平均瘤重―实验组平均瘤重）/空白对照组平均瘤重×100％。（2）肺部转移灶：取出小鼠完整的肺脏，用Bouin氏液固定24 h，然后放入无水乙醇，漂洗至黄色褪去，转移灶呈白色小点，用C-XTL-2型双目体视显微镜观察转移灶数，计算转移率。（3）瘤组织组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator，t-PA）含量：取1 g瘤组织，制成瘤细胞悬液，用免疫酶标法测定t-PA活性，t-PA免疫酶标药盒购自上海医科大学，按说明书操作。（4）瘤组织TXB2含量：取1 g瘤组织，制成瘤细胞悬液，用放免法检测TXB₂含量，TXB₂放免检测药盒购自苏州医学院血栓与止血研究室，按说明书操作。（5）瘤组织6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）：用放免法测定，药盒购自苏州医学院血栓与止血研究室，按说明书操作。（6）白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）：取小鼠脾脏制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为2×10⁶/ml，用免疫酶标法测定，IL-2免疫酶标药盒购自法国免疫技术公司，按说明书操作。（7）肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）：同IL-2操作，TNF-α免疫酶标药盒购自法国免疫技术公司。
1.6   统计学方法   F检验。

2  结 果
2.1   益气养阴中药对实验小鼠瘤体的抑制作用   益气养阴中药对Lewis肺癌、B16黑色素瘤小鼠的瘤体均有一定的抑制作用，其中以益气组的瘤重抑制率最为显著，益气中药对Lewis肺癌、B16黑色素瘤的瘤重抑制率分别为45.7％和42.9％，养阴组的瘤重抑制率明显低于益气组和益气养阴组，而益气养阴组的瘤重抑制率与益气组相仿。结果见表1。

表1 各组实验小鼠瘤重及抑制率比较
Tab 1 Comparison of tumor weight and inhibiting rate in mice of 5 groups
                                                                                                                     (`x±s )

2.2   益气养阴中药对实验小鼠肺转移的抑制作用  益气养阴组实验小鼠的肺转移抑制率优于益气组和养阴组，但无显著性差异；与空白对照组比较，则有显著性差异。化疗组肺转移抑制率与空白对照组比较无显著性差异。结果见表2。

表2 各组实验小鼠肺转移灶及抑制率比较
Tab 2 Comparison of number of metastatic tumor and inhibiting rate in mice of 5 groups
                                                                                                                   (`x±s )

2.3   益气养阴中药对瘤组织TXB2、6-Keto-PGF1α及t-PA含量的影响   益气养阴中药能明显抑制瘤组织TXB2和6-Keto-PGF1α含量，提高t-PA含量，对B16黑色素瘤及Lewis肺癌的作用趋向一致，但对转移性强的B16黑色素瘤的抑制作用更为明显，且益气养阴中药的作用优于单纯的益气或养阴。结果见表3。

表3 各组实验小鼠瘤组织TXB2、t-PA和6-Keto-PGF1α含量比较
Tab 3 Comparison of concentration of TXB2, t-PA and 6-Keto-PGF1α of tumor in mice of 5 groups
                                                                                                                                        (`x±s   , pg/g)

表4 各组实验小鼠脾脏IL-2和TNF-α含量比较
Tab 4 Comparison of concentration of IL-2 and TNF-α of spleen in mice of 5 groups
                                                                                                              (`x±s   , ng/g)

3  讨 论
     采用中医中药以扶正为主治疗恶性肿瘤，在提高机体免疫功能、改善症状、延长生存期及减轻放、化疗毒副作用等方面具有独特作用；但在抗癌肿转移方面的研究报道尚属鲜见^［5］。在对恶性肿瘤术后患者进行中医扶正治疗的过程中，初步观察到中医药具有一定的抗术后转移的作用^［6］。本实验观察益气养阴中药抗癌转移的作用，结果显示：益气养阴中药具有抑制Lewis肺癌及B16黑色素瘤的作用。益气、养阴与益气养阴组对Lewis肺癌的瘤重抑制率，明显高于化疗组和空白对照组，其中尤以益气组的抑制作用最为显著。对于Lewis肺癌的肺转移抑制率，益气养阴组显著高于空白对照组（P ＜0.05）；对于B16黑色素瘤的肺转移抑制作用，益气养阴组和养阴组均显著高于空白对照组（P ＜0.01）。
     实验结果显示：对瘤体的抑制作用，益气组与益气养阴组相似，均优于养阴组。而对实验动物肺转移的抑制作用则益气养阴组和养阴组均优于益气组。同时，益气养阴中药具有提高荷瘤小鼠IL-2、TNF-α水平的作用。TNF-α和IL-2在肿瘤的治疗中发挥重要作用。国内外研究表明：IL-2对肿瘤细胞无直接细胞毒性作用，主要通过调节机体的免疫系统发挥抗肿瘤效应，TNF-α则是迄今为止所发现的直接抑制和杀伤肿瘤细胞作用最强的细胞因子，且不损伤正常细胞的功能^［7］。本研究显示：益气养阴中药能提高IL-2、TNF-α细胞因子的水平，从而发挥抗癌效应，这可能是扶正中药抗癌和抗转移的作用机制之一。实验结果显示：益气养阴中药对Lewis肺癌和B16黑色素瘤细胞合成分泌TXB2有明显的抑制作用，对6-Keto-PGF1α也有一定的抑制作用，同时能促进t-PA的合成、分泌，降低癌细胞的黏附能力。对于TXB2的抑制作用，养阴组优于益气组；对于t-PA的促进作用，益气组优于养阴组；益气养阴组则对TXB2的抑制和t-PA的升高均有较明显的作用。以上结果提示，益气养阴中药具有一定的抗转移作用，而其抗转移的作用机制之一，可能是通过抑制癌细胞分泌凝血物质TXB2和促进纤溶物质t-PA，从而起到抗癌转移的作用。因此，益气养阴中药对肿瘤细胞分泌功能的正向调节作用，体现了益气养阴扶正中药在抗癌转移过程中能最大限度地调动机体的抗癌能力，从而抑制癌细胞的转移。