J Chin Integr Med, 2005, 3(4): 299-302

Correspondence to: Prof. FANG Xian-Ming. E-mail: fxm621@126.com

作者简介: 方显明(1951-), 男, 硕士, 教授.

     血脂紊乱是由脂质代谢紊乱引起的一种常见病症，也是动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）性心血管疾病最重要的发病因素。因此，有效地调节血脂水平，防治血脂紊乱，防止AS的发生发展，对心血管疾病的防治具有重要意义。安心颗粒是我院治疗冠心病心绞痛取得显著疗效的中药制剂^［1］。为了证实该药对血脂紊乱的作用，本课题通过喂饲高脂饲料建立新西兰兔血脂紊乱模型，观察安心颗粒对血脂代谢及动脉粥样硬化病变超微结构的影响，为该药在防治冠心病中的作用提供实验依据。

1 材料与方法
1.1 实验材料 健康雄性新西兰兔32只，体质量2～2.5 kg，4～5月龄（广西中医学院动物实验中心提供，桂医动字11003）。安心颗粒，由人参、桂枝、栝蒌皮、水蛭、茯苓等药组成，广西中医学院瑞康医院制剂室制备，每包3.5 g（含生药4.5 g/g）。脂必妥片，成都地奥九泓制药厂生产，每片0.3 g，批号20021205。
1.2 实验方法
1.2.1 模型制作 所有实验动物在实验前均以普通饲料适应性喂饲1周，在稳定其血脂水平及代谢状况后，随机分为4组，即正常对照组、模型组、脂必妥片组和安心颗粒组，每组8只，分笼饲养。正常对照组采用普通饲料喂饲，喂饲10周。其余3组采用高脂饲料喂饲法造模^［2］：以1%胆固醇+15%鲜蛋黄+5%猪油+基础饲料为高脂饲料配方，将猪油加热熔化，胆固醇溶于猪油内，另将鲜蛋黄蒸熟后碾碎成粉，猪油、蛋黄粉加到普通饲料中一同搅拌均匀，共喂饲10周。脂必妥片组和安心颗粒组在喂饲高脂饲料的同时，每天分别以脂必妥片、安心颗粒灌胃1次（其中脂必妥片用量为0.156 g·kg^﹣1·d^﹣1，安心颗粒用量为0.231 g·kg^﹣1·d^﹣1，其用量按《中药药理实验方法学》中“人和动物按体表面积折算等效剂量比率表”计算^［3］。饮水不限，每日每只进食100～120 g饲料。
1.2.2 血清学检查 各组实验动物分别于给药前及给药第10周末，禁食12 h，经耳缘静脉取血，分离血清，采用日立717OS型全自动生化分析仪，测定血清总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglycerides, TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）、载脂蛋白A₁（apolipoprotein A₁, ApoA₁）、载脂蛋白B（apolipoprotein B, ApoB）水平。按酶学或免疫透射比浊法进行测定。血清脂质测定试剂盒（TC、TG、LDL-C、HDL-C）由澳斯邦生物工程有限公司生产；ApoA₁、ApoB试剂盒由上海玉兰生物有限公司提供。
1.2.3 主动脉超微结构观察 于第10周结束时将所有实验动物以气栓法处死。迅速打开胸腔，截取胸主动脉一段，将其修成1 mm×2 mm面积大小，用牙签移至盛有冷的固定液的小瓶中。经固定、脱水、浸透包埋、切片与醋酸铀、柠檬酸铅染色，将做好的切片依次放置于日产H-600型透射电子显微镜下观察、摄像，并记录观察结果。
1.3 统计学方法 所有数据均以`x±s表示，两组间比较采用t 检验。

2 结 果
2.1 安心颗粒对血脂的影响 造模前受试动物的血脂水平均为正常。造模10周后，与正常对照组比较，模型组血清TC、TG、LDL-C、ApoB显著升高(P <0.01)，ApoA1/ApoB比值显著降低（P<0.01），表明血脂紊乱动物模型造模成功。与模型组比较，安心颗粒组血清TC、TG、LDL-C、ApoB均降低（P<0.01）；脂必妥片组血清TC、TG、LDL-C低于模型组（P<0.01）；安心颗粒组血清TC、LDL-C又低于脂必妥片组（P<0.01）。见表1﹑表2。

表1 各组动物造模前后TC、TG、HDL-C和LDL-C水平的比较
Tab 1  Levels of TC, TG, HDL-C and LDL-C before and after administration in 4 groups
                                                                                                                                                                  (`x±s, mmol/L)

**P<0.01, vs normal control group; ^△△P<0.01, vs untreated group; ^▲▲P<0.01, vs Zhibituo Tablet group

表2 各组动物造模前后ApoA₁, ApoB, ApoA₁/ApoB水平的比较
Tab 2  Levels of ApoA₁, ApoB and ApoA₁/ApoB before and after administration in 4 groups
                                                                                                                                (`x±s)

**P<0.01, vs normal control group; ^△△P<0.01, vs untreated group

2.2 安心颗粒对主动脉超微结构的影响 透射电子显微镜下观察，正常对照组动物血管内皮细胞核及各细胞器存在，基底膜清晰可见，未见任何脂滴空泡（见图1A），中膜浅层肌细胞内各细胞器及微肌纤维均可见，未见脂滴空泡（见图1B）。模型组血管内皮细胞及中膜平滑肌细胞质内大量脂滴空泡，甚至形成脂囊（见图1C）。脂必妥片组动物大量脂滴沉积，平滑肌细胞质内各种细胞器明显减少，有些仅见少许线粒体及胞质细颗粒，胞质内仍可见少量肌微丝存在（见图2A）。安心颗粒组动物血管内皮细胞质内未见明显大脂滴空泡，偶见小脂滴空泡，各种细胞器存在，内弹力膜存在，中层平滑肌细胞质内无脂滴空泡，均可见细胞器及微肌丝（见图2B、C）。




图1 电镜下兔主动脉超微结构观察(一)
Fig 1  Ultrastructure of rabbit aorta observed by electron microscope (1)
A, B: Normal control group (×5000); C: Untreated group (×7500)





图2 电镜下兔主动脉超微结构观察(二)
Fig 2  Ultrastructure of rabbit aorta observed by electron microscope (2)
A: Zhibituo Tablet-treated group (×7500); B, C: Anxin Granule-treated group (×10000)

3 讨 论
    血脂紊乱是引起动脉硬化发生的始动因素。有研究表明，血脂紊乱可明显损伤动脉内皮细胞，造成内皮脱落、超微结构损害，刺激内膜增生^［4］。本研究得出的血脂水平结果表明，安心颗粒能拮抗造模后血清TC、TG、LDL-C、ApoB的增高，其拮抗TC、LDL-C增高的作用优于脂必妥片组。电镜下主动脉超微结构的观察则显示，模型组和脂必妥片组血管内皮细胞和平滑肌细胞大量脂质沉着，造成动脉管壁的损伤，超微结构受损。而安心颗粒组血管内皮细胞无明显脂质沉着，超微结构完整，与正常对照组相似，提示安心颗粒能调节血脂代谢，降低血脂水平，抑制血脂紊乱所致的动脉粥样硬化病变，具有防治血脂紊乱和动脉粥样硬化性心血管疾病的作用。
    中医认为，脂质代谢紊乱乃由脏气亏虚、气化功能失调所致。因血脂为水谷精微物质所化，参与机体的营养与代谢。若脏气亏虚，气化功能失调，不能运化输布水谷精微至周身，多余之脂质则会滞留沉积于血脉肌肉之中形成脂浊，进而影响血脉津液之运行以致痰浊、瘀血内着，终成脏气亏虚、痰瘀互结之错综复杂的病理变化。安心颗粒正是基于这一认识，采用人参、桂枝、栝蒌皮、茯苓、水蛭等具有补气、通阳、化痰、逐瘀功效的中药组成。现代药理研究证实，人参的主要药效成分为人参皂苷，而人参总皂苷能显著降低高脂饲养大鼠血中的TC、TG和丙二醛含量，保护血管内皮细胞，降低或减少动脉粥样硬化的发生^［5］；桂枝提取物或桂枝复方，可通过清除自由基、抗氧化而延缓或阻止血脂紊乱向动脉粥样硬化的进一步发展^［6，7］；水蛭能降低血脂紊乱家兔的TC、TG、LDL-C，调节血脂代谢（TG/HDL-C比值下降），促进HDL-C水平升高^［8］。我们以往的研究也证实，安心颗粒能提高清除自由基酶的活性，抑制脂质过氧化反应^［9］，故该药防治血脂紊乱的机制，可能与其降血脂和抗氧化作用有关。通过降低血脂水平尤其是降低血清LDL-C的浓度，减少脂滴在细胞的沉积。同时，其抗脂质过氧化的作用可减轻动脉内皮细胞损害，抑制血管平滑肌的增生，从而阻止AS的形成。